Golden Easy PCR rendszer (festékkel)

Kétkomponensű egyszerű PCR reakciórendszer.

Macska. Nem Csomagolás mérete
4993003 250 E (2,5 U/μl)
4993004 500 E (2,5 U/μl)

Termék leírás

Kísérleti példa

GYIK

Termékcímkék

Jellemzők

■ Jó stabilitás: Az egyedülálló formula nagyon stabilvá teszi az egész reakciórendszert. A rendszer olyan komponenseket tartalmaz, amelyek szükségesek a hatékony PCR -amplifikációhoz, mint például hőstabil DNS -polimeráz, dNTP -k, MgCl2 és pufferoldat, valamint különféle speciális stabilizátorok, amelyek nagymértékben növelik a polimeráz és a dNTP stabilitását normál hőmérsékleten és 4 ° C -on.
■ Gyors és egyszerű: Egyszerű és gyors kezelés. Egyszerűen keverje össze a két komponenst arányosan, majd adjon hozzá sablonokat és primereket a reakció beállításához, elkerülve a fárasztó lépéseket, amikor egyenként hozzáadja a különböző PCR -reakciókomponenseket. Minimalizálja a mintavételi hibákat és a keresztszennyeződést, kis hibával a különböző tételek között, és felhasználható félkvantitatív kísérletekben.
■ Széles alkalmazás és nagy érzékenység.
■ Minden reakciórendszer színezéket tartalmaz, és az elektroforézis közvetlenül a PCR lépések után is elvégezhető, így az eljárás gyors és munkaerő-takarékos.

Minőség ellenőrzés

Az SDS-PAGE tisztasága több mint 99%; Nem mutatható ki exogén nukleáz aktivitása; Egyetlen gén az emberi genomban hatékonyan amplifikálható; Egy hétig szobahőmérsékleten tárolva nincs jelentős aktivitásváltozás.

Stabilitás

A kétkomponensű egyszerű PCR rendszert használó termék 4 ° C-on egy hónapig tárolható, nyilvánvaló aktivitásváltozás nélkül.

Munkafolyamat

Lépés: Keverje össze a különböző összetevőket arányosan.

2. lépés: Azonnal kezdje el a kísérletet.

3. lépés: Közvetlen elektroforézis a keverékhez festékekkel.

4. lépés: Megfelelő kísérleti eredmények.

Final Reaction Concentration:

Minden termék személyre szabható az ODM/OEM számára. A részletekért,kattintson a Testreszabott szolgáltatás (ODM/OEM) lehetőségre


  • Előző:
  • Következő:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example A kétkomponensű egyszerű PCR rendszert (Golden Easy PCR System) alkalmazzák. A reakciórendszer 50 μl (Ha a reakciórendszerek eltérőek, kérjük, arányosan növelje vagy csökkentse a rendszerre utaló komponensek mennyiségét).
    Experimental Example Végső reakciókoncentráció
    K: Nincs erősítő sáv

    A-1 sablon

    ■ A sablon fehérje -szennyeződéseket vagy Taq -inhibitorokat stb. Tartalmaz - Tisztítsa meg a DNS -templátot, távolítsa el a fehérje -szennyeződéseket, vagy vonja ki a DNS -t a tisztító készletekkel.

    ■ A sablon denaturálása nem teljes - —Megfelelően növelje a denaturálási hőmérsékletet és hosszabbítsa meg a denaturálási időt.

    ■ Sablonromlás-Készítse elő újra a sablont.

    A-2 Alapozó

    ■ Rossz minőségű alapozók — Újra szintetizálja a primert.

    ■ Az alapozó lebomlása - A nagy koncentrációjú primereket a tartósítás érdekében kis térfogatban kell alikvotálni. Kerülje a többszörös fagyasztást és felolvasztást, vagy a tartós, 4 ° C-os fagyasztást.

    ■ Az alapozók nem megfelelő kialakítása (pl. Nem elegendő az alapozó hossza, dimer képződött az alapozók között stb.) -Az alapozók újratervezése (kerülje az alapozó dimer és a másodlagos szerkezet kialakulását)

    A-3 Mg2+koncentráció

    ■ Mg2+ a koncentráció túl alacsony —— Megfelelően növelje a Mg -t2+ koncentráció: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    A-4 Lángolási hőmérséklet

    ■ A magas lágyítási hőmérséklet befolyásolja az alapozó és a sablon kötését. - Csökkentse a lágyítási hőmérsékletet, és optimalizálja az állapotot 2 ° C -os gradienssel.

    A-5 Hosszabbítási idő

    ■ Rövid hosszabbítási idő - A hosszabbítási idő növelése.

    K: Hamis pozitív

    Jelenségek: A negatív minták a célszekvencia -sávokat is mutatják.

    A-1 A PCR szennyeződése

    ■ A célszekvencia vagy az amplifikációs termékek keresztszennyeződése - Óvatosan ne pipettázza a célszekvenciát tartalmazó mintát a negatív mintába, és ne öntse ki a centrifugacsőből. A reagenseket vagy berendezéseket autoklávozni kell a meglévő nukleinsavak eltávolítása érdekében, és a szennyeződés meglétét negatív kontroll kísérletekkel kell meghatározni.

    ■ A reagens szennyeződése —— A reagenseket alikvotálja és alacsony hőmérsékleten tárolja.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ a koncentráció túl alacsony —— Megfelelően növelje a Mg -t2+ koncentráció: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    ■ A primer helytelen kialakítása és a célszekvencia homológiája a nem célszekvenciával. -Újratervezett alapozók.

    K: Nem specifikus erősítés

    Jelenségek: A PCR amplifikációs sávok nincsenek összhangban a várt mérettel, legyen az nagy vagy kicsi, vagy néha mind specifikus amplifikációs sávok, mind nem specifikus amplifikációs sávok előfordulnak.

    A-1 Alapozó

    ■ Gyenge primer specificitás

    -Újratervezett alapozó.

    ■ A primer koncentrációja túl magas —— Megfelelően emelje a denaturálási hőmérsékletet és hosszabbítsa meg a denaturálási időt.

    A-2 Mg2+ koncentráció

    ■ Az Mg2+ a koncentráció túl magas —— Megfelelően csökkentse az Mg2+ koncentrációt: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    A-3 Hőstabil polimeráz

    ■ Túlzott enzimmennyiség —— Csökkentse megfelelően az enzimmennyiséget 0,5 U időközönként.

    A-4 Lángolási hőmérséklet

    ■ A lágyítási hőmérséklet túl alacsony--Megfelelően növelje a lágyítási hőmérsékletet, vagy alkalmazza a kétlépcsős hőkezelési módszert

    A-5 PCR ciklus

    ■ Túl sok PCR ciklus - Csökkentse a PCR ciklusok számát.

    K: Foltos vagy elkenődő szalagok

    A-1 Alapozó—— gyenge specifitás —— tervezze újra az alapozót, változtassa meg az alapozó helyzetét és hosszát annak fokozása érdekében; vagy végezzen beágyazott PCR -t.

    A-2 sablon DNS

    ——A sablon nem tiszta —— Tisztítsa meg a sablont, vagy vonjon ki DNS -t tisztító készletekkel.

    A-3 Mg2+ koncentráció

    - Mg2+ a koncentráció túl magas —— Megfelelően csökkentse a Mg -t2+ koncentráció: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    A-4 dNTP

    ——A dNTP -k koncentrációja túl magas —- Csökkentse megfelelően a dNTP koncentrációját

    A-5 Lángolási hőmérséklet

    ——Túl alacsony lágyítási hőmérséklet —- Megfelelően növelje a lágyítási hőmérsékletet

    A-6 Ciklusok

    ——Túl sok ciklus ——Optimalizálja a ciklusszámot

    K: Mennyi templát DNS -t kell hozzáadni egy 50 μl -es PCR reakciórendszerhez?
    ytry
    K: Hogyan lehet erősíteni a hosszú töredékeket?

    Az első lépés a megfelelő polimeráz kiválasztása. A hagyományos Taq polimeráz nem képes lektorálni a 3'-5 'exonukleáz aktivitás hiánya miatt, és az eltérés nagymértékben csökkenti a fragmensek kiterjesztési hatékonyságát. Ezért a hagyományos Taq polimeráz nem képes hatékonyan felerősíteni az 5 kb -nál nagyobb célfragmentumokat. A speciális módosítást tartalmazó Taq polimerázt vagy más nagy pontosságú polimerázt kell választani a kiterjesztési hatékonyság javítása és a hosszú fragmentum amplifikáció igényeinek kielégítése érdekében. Ezen túlmenően, a hosszú fragmensek amplifikálása megköveteli a megfelelő primer kialakítást, denaturálási időt, hosszabbítási időt, puffer pH-t stb. A sablon károsodásának megelőzése érdekében a denaturálódási időt 94 ° C -on ciklusonként 30 másodpercre vagy kevesebbre kell csökkenteni, és a hőmérséklet 94 ° C -ra történő felemelkedésének ideje az amplifikáció előtt kevesebb, mint 1 perc. Ezenkívül, ha a kiterjesztési hőmérsékletet körülbelül 68 ° C -ra állítja, és a meghosszabbítási időt 1 kb/perc sebességnek megfelelően tervezi, akkor biztosíthatja a hosszú fragmensek hatékony amplifikációját.

    K: Hogyan lehet javítani a PCR amplifikációs pontosságát?

    A PCR -amplifikáció hibaaránya csökkenthető különböző DNS -polimerázok nagy pontosságú használatával. Az összes eddig megtalált Taq DNS -polimeráz közül a Pfu enzim a legalacsonyabb hibaarányú és a legnagyobb hűségű (lásd a mellékelt táblázatot). Az enzimszelektálás mellett a kutatók tovább csökkenthetik a PCR mutáció sebességét a reakciókörülmények optimalizálásával, beleértve a puffer összetételének optimalizálását, a hőstabil polimeráz koncentrációját és a PCR ciklusszám optimalizálását.

    Írja ide üzenetét, és küldje el nekünk