2 × GC-ben gazdag PCR keverék

Nagy precizitású PCR MasterMix magas GC tartalmú sablonokhoz.

Ez a termék 2 × MasterMix, amely Taq Plus DNS -polimerázt, dNTP -ket, MgCl2 -t, reakciópuffert, PCR -fokozót, optimalizálót és stabilizátort tartalmaz. Előnyei a gyors erősítési sebesség, egyszerűség, nagy érzékenység, erős specifitás, jó stabilitás és hasonlók, és a legnagyobb mértékben csökkentheti a működési hibákat. Alkalmas nagy pontosságú PCR reakciókhoz és bonyolult szerkezetű sablonok amplifikálásához, például magas GC tartalomhoz és másodlagos szerkezethez. Hatékonyan képes amplifikálni akár 20 kb -os töredékeket egyszerű sablonokkal, és legfeljebb 10 kb -os töredékeket komplex sablonokkal.

Macska. Nem Csomagolás mérete
4992794 500 μl
4992795 500 μl

Termék leírás

GYIK

Termékcímkék

Jellemzők

■ Magas GC-tartalmú célfragmensek nagyon hatékony amplifikációja: Az optimalizált pufferrendszer és az egyedi formula segít a magas GC-tartalmú sablonok olvasztásában, maximalizálva a polimeráz amplifikációs hatékonyságát (GC%: 60%-75%).
■ Nagyon hatékony összetett sablonokhoz és másodlagos szerkezetű sablonokhoz.
■ Nagy pontosság: A PCR MasterMix nagy pontosságú polimerázt alkalmaz az erősítés pontosságának biztosítása érdekében.
■ A nagy hatékonyságú, szuper erős és stabil előkeverő rendszer minimalizálja a működési hibákat.

Minden termék személyre szabható az ODM/OEM számára. A részletekért,kattintson a Testreszabott szolgáltatás (ODM/OEM) lehetőségre


  • Előző:
  • Következő:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    K: Nincs erősítő sáv

    A-1 sablon

    ■ A sablon fehérje -szennyeződéseket vagy Taq -inhibitorokat stb. Tartalmaz - Tisztítsa meg a DNS -templátot, távolítsa el a fehérje -szennyeződéseket, vagy vonja ki a DNS -t a tisztító készletekkel.

    ■ A sablon denaturálása nem teljes - —Megfelelően növelje a denaturálási hőmérsékletet és hosszabbítsa meg a denaturálási időt.

    ■ Sablonromlás-Készítse elő újra a sablont.

    A-2 Alapozó

    ■ Rossz minőségű alapozók — Újra szintetizálja a primert.

    ■ Az alapozó lebomlása - A nagy koncentrációjú primereket a tartósítás érdekében kis térfogatban kell alikvotálni. Kerülje a többszörös fagyasztást és felolvasztást, vagy a tartós, 4 ° C-os fagyasztást.

    ■ Az alapozók nem megfelelő kialakítása (pl. Nem elegendő az alapozó hossza, dimer képződött az alapozók között stb.) -Az alapozók újratervezése (kerülje az alapozó dimer és a másodlagos szerkezet kialakulását)

    A-3 Mg2+koncentráció

    ■ Mg2+ a koncentráció túl alacsony —— Megfelelően növelje a Mg -t2+ koncentráció: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    A-4 Lángolási hőmérséklet

    ■ A magas lágyítási hőmérséklet befolyásolja az alapozó és a sablon kötését. - Csökkentse a lágyítási hőmérsékletet, és optimalizálja az állapotot 2 ° C -os gradienssel.

    A-5 Hosszabbítási idő

    ■ Rövid hosszabbítási idő - A hosszabbítási idő növelése.

    K: Hamis pozitív

    Jelenségek: A negatív minták a célszekvencia -sávokat is mutatják.

    A-1 A PCR szennyeződése

    ■ A célszekvencia vagy az amplifikációs termékek keresztszennyeződése - Óvatosan ne pipettázza a célszekvenciát tartalmazó mintát a negatív mintába, és ne öntse ki a centrifugacsőből. A reagenseket vagy berendezéseket autoklávozni kell a meglévő nukleinsavak eltávolítása érdekében, és a szennyeződés meglétét negatív kontroll kísérletekkel kell meghatározni.

    ■ A reagens szennyeződése —— A reagenseket alikvotálja és alacsony hőmérsékleten tárolja.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ a koncentráció túl alacsony —— Megfelelően növelje a Mg -t2+ koncentráció: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    ■ A primer helytelen kialakítása és a célszekvencia homológiája a nem célszekvenciával. -Újratervezett alapozók.

    K: Nem specifikus erősítés

    Jelenségek: A PCR amplifikációs sávok nincsenek összhangban a várt mérettel, legyen az nagy vagy kicsi, vagy néha mind specifikus amplifikációs sávok, mind nem specifikus amplifikációs sávok előfordulnak.

    A-1 Alapozó

    ■ Gyenge primer specificitás

    -Újratervezett alapozó.

    ■ A primer koncentrációja túl magas —— Megfelelően emelje a denaturálási hőmérsékletet és hosszabbítsa meg a denaturálási időt.

    A-2 Mg2+ koncentráció

    ■ Az Mg2+ a koncentráció túl magas —— Megfelelően csökkentse az Mg2+ koncentrációt: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    A-3 Hőstabil polimeráz

    ■ Túlzott enzimmennyiség —— Csökkentse megfelelően az enzimmennyiséget 0,5 U időközönként.

    A-4 Lángolási hőmérséklet

    ■ A lágyítási hőmérséklet túl alacsony--Megfelelően növelje a lágyítási hőmérsékletet, vagy alkalmazza a kétlépcsős hőkezelési módszert

    A-5 PCR ciklus

    ■ Túl sok PCR ciklus - Csökkentse a PCR ciklusok számát.

    K: Foltos vagy elkenődő szalagok

    A-1 Alapozó—— gyenge specifitás —— tervezze újra az alapozót, változtassa meg az alapozó helyzetét és hosszát annak fokozása érdekében; vagy végezzen beágyazott PCR -t.

    A-2 sablon DNS

    ——A sablon nem tiszta —— Tisztítsa meg a sablont, vagy vonjon ki DNS -t tisztító készletekkel.

    A-3 Mg2+ koncentráció

    - Mg2+ a koncentráció túl magas —— Megfelelően csökkentse a Mg -t2+ koncentráció: Optimalizálja a Mg -t2+ Az optimális Mg meghatározásához 1 mM -tól 3 mM -ig terjedő reakciókoncentrációval végezzük a koncentrációt2+ koncentráció minden sablon és primer esetében.

    A-4 dNTP

    ——A dNTP -k koncentrációja túl magas —- Csökkentse megfelelően a dNTP koncentrációját

    A-5 Lángolási hőmérséklet

    ——Túl alacsony lágyítási hőmérséklet —- Megfelelően növelje a lágyítási hőmérsékletet

    A-6 Ciklusok

    ——Túl sok ciklus ——Optimalizálja a ciklusszámot

    K: Mennyi templát DNS -t kell hozzáadni egy 50 μl -es PCR reakciórendszerhez?
    ytry
    K: Hogyan lehet erősíteni a hosszú töredékeket?

    Az első lépés a megfelelő polimeráz kiválasztása. A hagyományos Taq polimeráz nem képes lektorálni a 3'-5 'exonukleáz aktivitás hiánya miatt, és az eltérés nagymértékben csökkenti a fragmensek kiterjesztési hatékonyságát. Ezért a hagyományos Taq polimeráz nem képes hatékonyan felerősíteni az 5 kb -nál nagyobb célfragmentumokat. A speciális módosítást tartalmazó Taq polimerázt vagy más nagy pontosságú polimerázt kell választani a kiterjesztési hatékonyság javítása és a hosszú fragmentum amplifikáció igényeinek kielégítése érdekében. Ezen túlmenően, a hosszú fragmensek amplifikálása megköveteli a megfelelő primer kialakítást, denaturálási időt, hosszabbítási időt, puffer pH-t stb. A sablon károsodásának megelőzése érdekében a denaturálódási időt 94 ° C -on ciklusonként 30 másodpercre vagy kevesebbre kell csökkenteni, és a hőmérséklet 94 ° C -ra történő felemelkedésének ideje az amplifikáció előtt kevesebb, mint 1 perc. Ezenkívül, ha a kiterjesztési hőmérsékletet körülbelül 68 ° C -ra állítja, és a meghosszabbítási időt 1 kb/perc sebességnek megfelelően tervezi, akkor biztosíthatja a hosszú fragmensek hatékony amplifikációját.

    K: Hogyan lehet javítani a PCR amplifikációs pontosságát?

    A PCR -amplifikáció hibaaránya csökkenthető különböző DNS -polimerázok nagy pontosságú használatával. Az összes eddig megtalált Taq DNS -polimeráz közül a Pfu enzim a legalacsonyabb hibaarányú és a legnagyobb hűségű (lásd a mellékelt táblázatot). Az enzimszelektálás mellett a kutatók tovább csökkenthetik a PCR mutáció sebességét a reakciókörülmények optimalizálásával, beleértve a puffer összetételének optimalizálását, a hőstabil polimeráz koncentrációját és a PCR ciklusszám optimalizálását.

    Írja ide üzenetét, és küldje el nekünk